Мононуклеарные клетки

Категория: Статьи. 17 Май 2013

Мононуклеарные клетки

 Некоторые типирующие клетки были обнаружены во время исследования редких заболеваний, наследуемых по рецессивному типу, при которых зачастую имеется определенная степень кровного родства родителей, несмотря на то что сами, родители могут об этом иногда не подозревать. Если гены, ответственные за развитие заболевания, расположены близко от комплекса HLA (например, дефицитность по С2), шанс HLA-гомозиготности сильно повышается.

Приведенные ниже методические приемы включают в себя различные методы, применяемые в разных лабораториях. Забор крови производят в стерильных условиях; коагуляцию предотвращают добавлением гепарина. Также можно использовать другие антикоагулянты (ACD или ЭДТА). Де-фибринированная кровь тоже подходит для этих целей.

Если кровь используют не сразу после получения, ее следует разбавить равным объемом культуральной среды (RPMI-1640). После такой обработки кровь можно хранить или транспортировать при комнатной температуре в течение 24 ч или более.

Выделение лимфоцитов (мононуклеарные клетки) осуществляется обычно центрифугированием в градиенте фикол-изопака, но также можно использовать другие градиенты (метризамид, декстран или альбумин). Обогащенный лимфоцитами слой собирают и отмывают в среде или в сбалансированном солевом растворе, часто добавляют 5-20% сыворотку, уменьшающую потерю клеток.

Лимфоциты подсчитывают и концентрацию клеток доводят до нужной. В большинстве лабораторий концентрацию отвечающих клеток доводят до 5ХЮ4, а стимулирующих до 5-20ХЮ4 в каждой культуре. Стимулирующие клетки инак-тивируют рентгеновским облучением или обрабатывают мито-мидином С, после чего очень тщательно отмывают клетки.

Культуральная среда (RPMI - 1640, ТС199 или другие обогащенные среды) используется обычно с добавлением 10-20% сыворотки. Сыворотку берут, как правило, у мужчин, которым не делалось переливание крови, для того чтобы избежать возможной реакции со стороны HLA-антител.


Полезные записи
Выход гранулоцитов

Оптимальные условия культуры

Различие между цитотоксическими потенциалами разны...

Выделение лимфоцитов

Количество молекул IgG на индикаторных эритроцитах...

Сыворотки крови человека

Обсуждение