Методика высвобождения 5,Сг

Категория: Статьи. 02 Май 2013

Методика высвобождения 5,Сг

Для того чтобы закончить испытание, в каждую пробирку добавляется по 0,6 мл холодного раствора фосфатного буфера и содержимое центрифугируется 5 мин при 600 g. Затем из каждой пробирки отбирается по 0,5 мл супернатанта для подсчета радиоактивности. Количество 5,Сг также можно определить при помощи сцинтиляционного счетчика, который в 5 раз повышает эффективность подсчета по сравнению со стандартными методами.

Этот метод подсчета оказывается оптимальным для условий кратковременного испытания, при котором уровень спонтанного выхода должен быть менее 20%. В тех системах, где спонтанный выход чрезмерно высок (т. е. более 30%), больше подходят другие методы подсчета уровня специфического выхода. Для неиспытавшихся систем следует представлять фактические количественные экспериментальные показатели.

На основании полученных в результате опыта данных о специфическом выходе 51Сг строится график, на который наносятся значения соотношений лимфоцитов и клеток-мишеней, выраженные в log0. При этом используется специальная чертежная логарифмическая бумага. Как правило, на графике наблюдается постепенное закругление кривой от 20 до 80% лизиса.

Единица лизиса (LU) обычно определяется как количество лимфоцитов, необходимое для того, чтобы вызвать 50% специфический лизис данного количества клеток-мишеней за определенный период времени инкубации (в Данном случае 10000 клеток-мишеней и 3 ч инкубации). Используя значения LU, полученные в результате построения на графике кривых при разных концентрациях клеток, можно вычислить количество LU на 106 оставшихся в живых клеток, а также на испытываемые культуру или орган. Характеристика CTL

Эта методика позволяет разделять клетки на основании их размеров. Клеточная суспензия наносится очень тонким слоем сверху на колонку, заполненную изотоническим буферным раствором, и клетки осаждаются под действием гравитационных сил до тех пор, пока они полностью не разделятся по размерам. Для стабилизирования жидкости и в колонке используется плотностный поверхностный градиент, на который наслаивают исследуемый материал.


Полезные записи
Истощение розеток

Истощение лимфоцитов, образующих розетки с эритроц...

Реакция на митоген

Лимфоциты различного происхождения

Подготовка колонок с гранулами, покрытыми иммунным...

Удаление моноцитов

Обсуждение