C4b-C3b инактиватор  (C4b-C3b INA)

Категория: Статьи. 11 Май 2013

C4b-C3b инактиватор  (C4b-C3b INA)

Для подсчета CRL-розеток и для того, чтобы отличить их от розеток, образующихся с человеческими эритроцитами, гранулоцитами или моноцитами, требуется фазово-контраст-ный микроскоп. Для этой цели самым подходящим является микроскоп Nikon L-KE, снабженный фазово-коитрастным устройством. Также подходит микроскоп Leitz (Ernst Leitz, Inc., Rockleigh, N. I.) снабженный фазово-контрастным устройством типа Zernike.

Вращающее устройство для пробирок с тканевыми культурами, имеющее горизонтальную ось вращения, требуется при постановке теста для постоянного поддержания клеток в состоянии суспензии и для осуществления межклеточного взаимодействия. Самой удачной для данных целей оказалась камера с радиусом 9 дюймов (22, 86 см) и со скоростью вращения от 6 до 60 об/мин.

ЭБ из 10 мл крови барана трижды отмывают в 50 мл охлажденного вольду физиологического раствора (10 мин, 1000 g, 4°С). Слой лейкоцитов барана (светлый слой кровяного сгустка) на верхней части осадка эритроцитов (содержащий некоторое количество ЭБ) отбрасывают после первого центрифугирования. После последнего отмывания ЭБ в концентрации 5% v/v (примерно 1Х109/мл) в 0,01 ЖВБЭ и нагревают до 37 °С. Концентрацию ЭБ проверяют спектрофотометрическим путем.

Для этого 0,5 мл образца, содержащего примерно 5% суспензию ЭБ, лизируют добавлением 14,5 мл воды (разведение 1:30). После центрифугирования, если суспензия эритроцитов действительно является 5% v/v, значение при OD54i будет равным 0,350 в стандартной 1 см кювете. Если значение оптической плотности другое, что указывает на иную концентрацию клеток, объем клеточной суспензии следует довести до объема, при котором будет достигнута соответствующая концентрация.

IgM-антитела против ЭБ разводят в 0,01 ЖВБЭ (если антитела получены из Cordis Laboratories, следует использовать концентрацию в 3 раза большую, чем рекомендует фирма) и нагревают до 37 °С. Смешивают равные объемы ЭБ и разведенных в нужном соотношении антител к ЭБ, затем смесь инкубируют 30 мин при 37 °С и отмывают один раз в охлал денном на льду 0,01 ЖВБЭ и дважды охлажденным ЖВБ.


Полезные записи
Стандартные растворы

Инкубация очищенной популяции

Подготовка колонок для удаления с них lg-положител...

Фильтрование через нейлоновую вату

Функциональная характеристика розеткообразующих кл...

Перспективность клинического применения вещества

Обсуждение