Материалы, необходимые для окраски методика окраски

Категория: Статьи. 19 Май 2013

Материалы, необходимые для окраски методика окраски

Перед использованием следует ресуспендировать частички. Клетки окончательно суспендируются в фосфатном буфере рН 7,4, содержащем 0,02% азида натрия и 20 мл бычьего сывороточного альбумина (PBS - ВСА) после нескольких отмываний. Необходимо отметить, что при осуществлении метки клеток латексом в смеси не должно быть белка.

Материалы и оборудование для окраски. Предметные стекла с матовым концом, покровные стекла 22x22 мм, пастеровские пипетки. Бесцветный, быстровысыхающий лак для ногтей. Окрашенные лаки часто содержат флюоресцентные краски, окрашивающие медленно клеточные мембраны.

Используются круглодонные пластмассовые пробирки, 10 X X75мм- (Falcon).

Процесс окраски. Используется методика окраски Pernic с соавт. В случае использования мононуклеарного слоя клеток из периферической крови, получаемой в результате центрифугирования в изопак-фиколе, моноциты метят частичками латекса. Концентрацию клеток в суспензии доводят до 2,5 7 клеток на 1 мл в фосфатном буфере, содержащем 0,2% азида натрия и 20 мг на 1 мл бычьего сывороточного альбумина, 0,025 мл клеточной суспензии переносят в пробирку, размером 10X75 мм.

Окраску обычно производят при комнатной температуре, но иногда, если этого требуют цели эксперимента,-при 4°С или при 37°С, как описывается ниже. К клеткам добавляют 0,025 мл конъюгата антител и перемешивают. После 30-минутной инкубации добавляют 2 мл PBS -ВСА и клетки центрифугируют.

Образующуюся пену отсасывают, супернатант осторожно сливают. Осадок ресуспендируют после удаления последней капли супернатанта. Таким образом клетки трижды отмывают. Супернатант, образующийся после последнего отмывания, сливают только тогда, когда все готово для приготовления препарата. Верхнюю часть пробирки быстро прижимают к салфетке и надосадочную жидкость удаляют; осадок ресуспендируют несколькими энергичными движениями.

В пробирку быстро вносится пастеровская пипетка, и клеточная суспензия быстро переносится в капилляре пипетки (высота столбика суспензии 0,5-1,0 см) на предметное стекло.


Полезные записи
Гемолитическая активность комплемента

Препаративное фракционирование активированных лимф...

Соединение HP с сефарозой

Обсуждение