Лимфоциты, которые собирают со дна пробирки

Категория: Статьи. 17 Апрель 2013

Лимфоциты, которые собирают со дна пробирки

После центрифугирования при комнатной температуре в течение 20 мин при 2 800 об/мин (1 200g) в интерфазе будут находиться частично истощенные Е+-клетки. Так как выход лимфоцитов в этой фракции низкий (5-15%), попытка дальнейшего фракционирования путем повторного цикла истощения ЭБ-розеток не имеет смысла. Однако из-за того, что процент загрязняющих моноцитов может повышаться (с 1 % до разделения и до 5% в интерфазе после второго центрифугирования в ФИП), требуется дополнительная стадия очистки, которая проводится в течение 1 ч в 50% растворе сыворотки.

Лимфоциты, которые собирают со дна пробирки, можно подвергнуть дальнейшей обработке после разрыва розеток с ЭБ: путем нагревания, встряхивания, лизиса ЭБ в NH4C1.

Истощение, проводимое при данных условиях, приводит к уменьшению процента ЭБ-связывающих клеток (Е+-клетки) в интерфазе в 2 или 3 раза (с 75 до 10-30%) и к соответствующему увеличению количества лимфоцитов, имеющих рецепторы к комплементу (ЕАС+-клетки) или к поверхностно-связанным иммуноглобулинам (SIg-клетки). К-клеточная активность Е+-истощенной фракции характеризуется таким же увеличением. В обогащенной Е+-фракции эти пропорции наблюдаются в обратном порядке.

Если не проводить дальнейшего фракционирования, К-клеточная активность осадка, обогащенного Е+-клетками, будет составлять 10-15% от той, которая наблюдается в нефракциони-рованном препарате.

Из этих результатов можно сделать вывод, что большинство Е+-лимфоцитов лишены К-клеточной активности. Однако нельзя заключить, что К-клетками являются Е--клетки, так как истощение Е+-клеток неполное и в осадке всегда обнаруживается остаточная цитотоксическая активность. Имеются доказательства тому, что по крайней мере несколько лимфоцитов, обладающих К-клеточной активностью, в этой системе являются Е+-клетками.

Наиболее ярко это демонстрируют опыты, в которых в качестве эффекторных клеток используются лимфоциты, обработанные нейраминидазой.


Полезные записи
Сцинтилляционная жидкость

Полученные партии ЕАС 14

Поверхность градиента

Сочетание разделения е-розеток и адсорбции на еа-м...

Выделение и очистка IgG

Стимулирующая способность

Обсуждение