Бусы (гранулы)

Категория: Статьи. 19 Апрель 2013

Бусы (гранулы)

Перед началом фракционирования на колонке клетки должны храниться в суспензии при температуре 4°С (клетки, находящиеся не в суспендированной форме, агрегируют, и, если их не ресуспендировать сразу после центрифугирования, то большое количество их погибает.

Среда, которую используют для приготовления клеток, должна отвечать как минимум двум требованиям: создавать благоприятные условия для хранения клеток и не содержать веществ, которые могли бы помешать процессу разделения клеток.

Для разделения мышиных, человеческих или крысиных: лимфоцитов мы использовали следующую среду: PBS - D, рН 7,1-7,5; NaCl 8 г, КС1 0,2 г, Na2HP04-2H20 1,47 г;. КН2РО4 0,2 г; все доводится дистиллированной водой до объема 1 л. Затем все смешивается с 5% эмбриональной сывороткой теленка (при ее наличии). Перед фракционированием клетки не обязательно хранить при 4° С, если последующий клеточный тест этого требует; при всех других случаях эта желательно, так как способность молекул иммуноглобулинов, открепляться от клеточных мембран уменьшается.

Большинство белков способно практически полностью обволакивать стеклянные или пластиковые бусы, хотя причины, вызывающие этот процесс, неизвестны. Каков бы ни был механизм, силу сцепления белковых молекул с гранулами, можно сравнить с той, которая наблюдается между молекулами альбумина, покрывающими гранулы, например, в случае использования их в качестве специфического иммуносор-бента для связывания и элюции анти-БСА антител. Однако для любого нового, неизвестного белка полезно определять условия его связывания с имеющимися бусами для обеспечения нужной силы сцепления. Сцепление молекул белка с гранулами обычно происходит в изотоническом растворе при нейтральном значении рН (или при значении рН среды, которая будет использоваться в дальнейшем), а концентрация белка при этом должна быть 1 мг/мл или немного больше.

Для большинства белков такой концентрации вполне-достаточно для осуществления полного насыщения поверхности всех гранул, но для некоторых белков могут потребоваться более высокие концентрации.


Полезные записи
Обработка клеток нейраминидазой

Способность фракции

Современные методы

Подверженность человеческих клеток действию вируса...

Препараты эффекторных клеток

Сцинтилляционная жидкость

Обсуждение