Культуральные камеры

Категория: Статьи. 08 Май 2013

Культуральные камеры

Равные количества клеточной суспензии, содержащие 3x10е лейкоцитов, переносят в нужное количество стеклянных капилляров объемом на 20 мкл, с внутренним диаметром 0,6 мм (Drummond HemocapsR, Drummond Scientific Supplies, Broomall, Pa., USA). Капилляры запаивают в пламени, центрифугируют при 900 g при комнатной температуре 10 мин и подрезают напильником чуть ниже границы раздела клетки-жидкость, чтобы избежать засорения отверстия тромбоцитами. Сразу же после отрезания капилляра каждую пробирку помещают в культуральную камеру объемом на 0,5 мл (можно употреблять полистироловые камеры, предназначенные для миграции клеток Sterilin Ltd., Middesex, England), содержащие ту же среду 199 с 10% лошадиной сывороткой, как описано выше. Капилляры, запаянные концом, закрепляют на дне камер силиконовой смолой (Dow Corning Corp.). Необходимо проследить, чтобы капилляр целиком располагался на дне камеры.

Антигены вносят в культуральные камеры соответственно плану эксперимента; камеры заполняют до верха культуральной средой и сверху запечатывают покровным стеклом, которое приклеивают силиконовой смолой. Все культуры и все концентрации антигенов, так же как и контроли, ставятся в четырех параллелях. Контрольные культуры содержат только культуральную среду и/или вещество, сравнимое с антигеном, но не содержат исследуемого антигена.

После инкубации при 37° С в течение 24 ч изучают зоны миграции лейкоцитов вокруг отверстия капилляра. Исследование проводится с помощью проекцирующего устройства; зоны миграции лейкоцитов зарисовывают на бумаге, вырезают и взвешивают. Вариации в четырех параллелях не должны превышать

Агарозная среда. 2% агарозу (Litex, Glostrup, Denmark) в дистиллированной воде приготавливают раз в две недели и хранят при 5° С. Свежую культуральную среду агарозы готовят каждый день заново. 2% агарозный гель нагревают в кипящей воде.

После формирования золя агарозу охлаждают до 47° С в водяной бане.


Полезные записи
Подготовка лимфоцитов к замораживанию

Фракционирование лимфоцитов на колонках, наполненн...

Литогенные-свойства антител против 62-микроглобули...

Зависимость чувствительности подклассов в-клеток к...

Действие специфического иммунологического компонен...

Количество вирусной ДНК

Обсуждение