Элюция клеток с колонки

Категория: Статьи. 23 Апрель 2013

Элюция клеток с колонки

Общий выход лимфоцитов во фракции клеток, не задержавшихся на колонке и в двух фракциях, элюированных 0,1 мг/мл и 1 мг/мл D-GalNAc, соответственно в 18 независимых опытах с использованием четырех различных НР-препаратов был равен 66± 16% (среднее ±С.О.). На результаты не оказывали влияние ни различные группы крови доноров лимфоцитов (3 донора относились к А группе крови), ни количество клеток, внесенных в колонку (концентрация лимфоцитов достигала 100Х106 на 1 колонку). Как будет видно дальше, при подсчете выхода общих количеств клеток с различными мембранными маркерами с колонки, фракционирование на НР-сефарозной колонке не приводит к селективной потере клеток, имеющих какой-либо из изучаемых маркеров. Количество снятых с колонки SIg+-wieTOK было небольшим.

Во фракции клеток, не задержавшихся на колонке (фракция I, 10% от общего числа внесенных на колонку клеток), имелось намного меньше НР+- и Е+-клеток, чем в нефракционированной пробе. С другой стороны, около 55% вышедших с колонки клеток были SIg+ или образовали розетки с ЕАС.

Последующая элюция клеток с колонки той же средой с добавлением 0,1 мг D-GalNAc/мл привела к получению следующей фракции клеток (фракция II), содержащей   почти 15% внесенных на колонку клеток. Главная цель осуществления элюции клеток низкими концентрациями углевода - увеличить чистоту фракции, элюированной высокими концентрациями сахара. Как видно фракция II является смешанной и содержит промежуточные количества (соотношения) клеток, имеющих различные поверхностные маркеры.

Большинство клеток были сняты с колонки в результате последующей элюции 1 мг D-GalNAc/мл (фракция III). Почти 90% из элюированных клеток данной фракции были НР+ и имели рецепторы к эритроцитам барана. Однако в этой фракции имелись также некоторые количества SIg+ клеток и клеток, образующих розетки с ЕАС.

Когда фракция III была внесена на новую НР-сефарозную колонку и элюи-рована вышеописанным способом, оказалось, что в отсутствие D-GalNAc через колонку клетки не проходили.


Полезные записи
Разделение клеток костного мозга

Гетерогенность HLA-D-

Разделение клеток

Обработанные сыворотки

Стеклянные бусы

Защита при хранении

Обсуждение