Электрофоретическое фракционирование лимфоцитов

Категория: Статьи. 21 Апрель 2013

Электрофоретическое фракционирование лимфоцитов

 С этой целью обычно используют сахарозу, глюкозу и глицин. Для фракционирования лимфоидных клеток в нашей лаборатории использовался буфер следующего состава: 0,04 М ацетат калия, 0,015 М триэтаноламин, 0,24 М глицин, рН 7,35, изо-тоничность достигается за счет 0,011 М и глюкозы и 0,03 М. сахарозы (КР буфер).

Данный КР буфер, содержащий большое количество сахара, является прекрасной средой для бактерий и грибков. Ьсли клетки, разделяющиеся на приборе, в дальнейшем предполагают использовать в экспериментах in vitro, необходимо соблюдать асептические условия, а прибор следует стерилизовать. Стерилизацию разделительной камеры можно проводить 1% формальдегидом и 0,2% двуокисью хлора, а затем промыть камеру стерильной водой (3-5 л).

Электродные камеры можно стерилизовать таким же образом 1% формальдегидом, а затем промыть водой.

Электрофоретическое фракционирование лимфоцитов мыши. Обогащенная популяция мышиных лимфоцитов приготавливается для электрофоретического фракционирования следующим образом: лимфоидные органы суспендируют по отдельности в среде MEM, содержащей ЭТС, при +4° С. Клеточные агрегаты удаляют осаждением или фильтрованием через ватный тампон. Прилипающие и фагоцитирующие клетки удаляют двукратной адсорбцией на стекле или/и при добавлении порошка железа и последующей обработке смеси магнитом. Эритроциты лизируют 0,83% хлоридом аммония.

Белые кровяные клетки получают путем осаждения эритроцитов из гепаринизированной крови в эквивалентном объеме предварительно нагретого плазмагеля (Roger Bellon, Neuilly, France); эритроциты лизируют, а гранулоциты удаляют при помощи магнита после их обработки частичками железа.

Для электрофореза клетки переносят в электродный буфер (КР буфер). Этот буфер способствует слипанию клеток между собой. Слипание можно предотвратить, применяя ступенчатую процедуру переноса клеток.


Полезные записи
Обработанные сыворотки

Стеклянные бусы

Защита при хранении

Обработка клеток нейраминидазой

Способность фракции

Современные методы

Обсуждение