Фильтрование через нейлоновую вату

Категория: Статьи. 10 Май 2013

Фильтрование через нейлоновую вату

Фильтрование через нейлоновую вату позволяет получить такую же высокую степень очистки лимфоцитов, как и при обработке суспензии частичками железа. Получающаяся в результате процедур концентрация сыворотки (или плазмы) высока (>50%), на колонке не наблюдается никаких специфических потерь какого-либо из главных подклассов лимфоцитов (в том числе и В-клеток); К-клеточная активность клеток настолько же высока, как и при обработке частичками железа. Эти результаты сильно отличаются от тех, при которых концентрация сыворотки на колонке 510%.

В этом случае выход лимфоцитов ниже, а также происходит потеря В-клеток  и К-клеточная активность часто понижена.

При сравнении цитотоксического потенциала различных препаратов лимфоцитов К-клетки помещают в микрокультуры; общий объем при этом должен быть 0,3 мл в каждой пробирке. Мы используем конические инкубационные пробирки, изготовленные из пастеровских пипеток путем запаивания капиллярного конца. Эритроциты цыпленка (Ее), меченные 5Сг, используют в качестве клеток-мишеней; в этих целях также подходят эритроциты быка или барана. 10-20-недель-ных цыплят обескровливают путем пункции сердца; кровь обрабатывают 0,1 мл гепарина (100 ед/мл) в шприце на каждый миллилитр крови.

0,1 мл крови цыпленка, разведенный в отношении 1:20 в ТХ + 2,5% ЭТС (15-20Х106 Ее), инкубируют в течение 1 ч при 37° С с 0,1 мл Na251Cr04 (0,5- 1,0 м Ci/мл, 3-10 мкг Cr/мл) (Radiochemical Centre, Amer-sham, England). Эритроциты дважды отмывают в ТХ + 2,5% ЭТС, подсчитывают их число и хранят сконцентрированными в комочках до добавления к лимфоцитам в инкубационных пробирках. Гипериммунную кроличью антисыворотку к эритроцитам цыпленка (а-Ес) получали путем многократного внутривенного введения, как описывалось выше.


Полезные записи
Инкубация очищенной популяции

Подготовка колонок для удаления с них lg-положител...

C4b-C3b инактиватор  (C4b-C3b INA)

Функциональная характеристика розеткообразующих кл...

Перспективность клинического применения вещества

Подготовка лимфоцитов к замораживанию

Обсуждение