Высвобождение фактора ингибиции миграции лейкоцитов, индуцированное конканавалином А (Кон-А) (LIF)

Категория: Статьи. 15 Май 2013

Высвобождение фактора ингибиции миграции лейкоцитов, индуцированное конканавалином А (Кон-А) (LIF)

Продукция лимфокинов. 10 мл венозной крови собирают в две 10-миллилитровые полистиреновые пробирки, каждая из которых содержит по 250 ед. гепарина в 5 мл HBSS. Разведенную кровь осторожно наслаивают на 3 мл раствора изопак-фикола в 10-миллилитровых полистиреновых пробирках и центрифугируют в течение 20 мин при 400 g. Из интерфазы между плазмой и раствором изопак-фикола отсасывают пипеткой очищенные на 95-99% мононуклеарные клетки и отмывают 3 раза в HBSS.

Далее клетки суспендируют при концентрации 2,56 в 1 мл в среде 199, содержащей 67 ед. пенициллина и 67 мкг/мл стрептомицина, свободной от сыворотки. Две равные части клеточной суспензии инкубируют в присутствии или без (контрольный супернатант) конканава-лина A (Pharmacia, Uppsala, Sweden; 80 мкг/мл). После культивирования при 37 °С в течение 22 ч в насыщенной водяными парами атмосфере с 2% С02 суспензии центрифугируют при 670 g в течение 10 мин и в контрольный супернатант вносят Кон-А в концентрации 80 мкг/мл.

Вторая ступень непрямого метода определения фактора ингибиции миграции (двуступенчатого теста) в агарозе, описанного выше, осуществляется при использовании в качестве мигрирующих клеток периферических лейкоцитов крови от здоровых, неродственных доноров. При испытании постепенно разведенных супернатантов на LIF-активность получают полуколичественные результаты.

Практика показывает, что прямые тесты (LMCT и LMAT), при которых популяция периферических клегок крови используется в качестве источника специфически реагирующих лимфоцитов и в качестве смеси полиморфноядерных гранулоци-тарных индикаторных клеток, позволяют получать важные результаты при изучении клинических состояний гиперчувствительности. Прямой тест LMAT оказался очень полезным при работе с очищенными антигенсодержащими веществами, такими, как PPD, вирусы, бактериальные культуры и KLH, и менее полезным при работе с загрязненными антигенсодержащими препаратами, такими как гомогенаты тканей при выявлении органоспецифических антигенов и опухолевоспеци-фических антигенов.


Полезные записи
Сыворотки крови человека

Тест на наличие SIg до и после обработки

Два отмывания

Вирус Эпштейна - Барра

Популяции НЭП

Стандартные растворы

Обсуждение