Выход гранулоцитов

Категория: Статьи. 17 Май 2013

Выход гранулоцитов

Для больших объемов крови целесообразна предварительная концентрация клеточной суспензии путем центрифугирования перед разделением клеток на изопак-фиколе. Это видно, где приведены результаты разделения 500 мл крови после удаления эритроцитов. Чистота клеточных фракций, собранных с поверхности и со дна пробирки, в данном случае не отличалась от чистоты клеток, выделенных при помощи этой же методики из меньших объемов крови; выход клеток составил 60%.

Выход гранулоцитов в большой степени зависит от процедуры отмывания. Для гранулоцитов эта стадия имеет гораздо более важное значение, чем для мононуклеарных клеток. После двукратного отмывания клеток 0,9% раствором NaCl наблюдалась потеря примерно 60% клеток. Потери клеток были частично предотвращены (р<0,05), когда к промывающей жидкости добавляли 10% плазму крови мышей с ЭДТА.

Сама по себе ЭДТА (0,1%) не уменьшает потерю клеток.

Зрелые гранулоциты могут быть довольно эффективно выделены из крови больных хроническим миелолейкозом. В некоторых случаях при разделении крови этих больных верхняя фракция клеток состоит почти на 90% из миелобластов и миелоцитов, остальная часть клеток представлена в основном лимфоцитами.

В верхнем слое суспензии клеток может находиться значительное количество моноцитов. Их можно удалить путем предварительной инкубации с частичками железа перед центрифугированием на изопак-фиколе. Нагруженные железом моноциты в процессе центрифугирования опускаются на дно пробирки.

Проделывались 2 процедуры.

А. Клеточную суспензию, полученную в результате осаждения декстраном из 10 мл гепарннизированной крови, смешивали с равным объемом суспендированных частиц железа и смесь инкубировали при постоянном встряхивании в течение 30 мин при 37° С в водяной бане.

Б. 10 мл крови центрифугировали при 500 g 7 мин. Светлый верхний слой удаляли (1 мл) и смешивали с 1 мл суспензии частичек железа. После этого смесь инкубировали при тех же условиях, которые описываются в разделе А.


Полезные записи
Дополнительные элементы

Метод культивирования и постановка теста

Лимфоциты морской свинки

Оптимальные условия культуры

Различие между цитотоксическими потенциалами разны...

Мононуклеарные клетки

Обсуждение