Выделение лимфоцитов

Категория: Статьи. 16 Май 2013

Выделение лимфоцитов

Лимфоциты крови человека выделяли для анализа CRL из крови при помощи карбонильного железа и центрифугирования в фикол-гипаке. Если использовать только центрифугирование в фикол-гипаке, препарат лимфоцитов будет содержать слишком высокий процент моноцитов. К сожалению, в настоящее время появились данные о том, что карбонильное железо иногда способствует истощению В-клеток из препаратов лимфоцитов (R. Winchester, G. Ross, неопубликованные данные).

Так как моноциты могут образовывать розетки с ЕАС, которые необходимо отличать от CRL-розеток, следует метить моноциты латексом. Что касается препаратов лимфоцитов мыши, С-рецепторнозависимые розетки, образованные моноцитами и нейтрофилами, можно специфически ингибировать, добавив 0,01 М ЭДТА в буфер, использующийся в тесте CRL.

Из-за того, что даже 5% невыделенных моноцитов могут вызвать увеличение процента CRL, препараты лимфоцитов необходимо всегда обрабатывать латексом для идентификации моноцитов. Для этого лимфоциты суспендируют в HBSS в концентрации 5Х105 в 1 мл, добавляют 25 мкл 5% латекса на каждые 2Х7 клеток. После 45 мин инкубации при 37 °С и перемешивания время от времени клетки отмывают трижды при 200 g в течение 10 мин и образец клеточной суспензии рассматривают под микроскопом, выявляя свободные частички латекса.

Если они имеются, клетки следует отмыть еще раз. После окончательного отмывания нужно с помощью Vortex mixer разбить агрегаты моноцитов, чтобы освободить лимфоциты, которые могли задержаться в комке. При подсчете CRL также нужно быть очень осторожным, так как какое-то количество моноцитов может не включить в себя латекс, а некоторые лимфоциты могут адсорбировать латекс на поверхности.


Полезные записи
Оптимальные условия культуры

Различие между цитотоксическими потенциалами разны...

Мононуклеарные клетки

Количество молекул IgG на индикаторных эритроцитах...

Сыворотки крови человека

Тест на наличие SIg до и после обработки

Обсуждение