Сыворотки крови человека

Категория: Статьи. 16 Май 2013

Сыворотки крови человека

 Объем раствора превышает исходный объем сыворотки в 5 раз. Затем снова проводят центрифугирование при 1000 g -80 мин при 4°С. Отмытый осадок растворяют, осторожно ресуспендируя в охлажденном во льду и разбавленным водой в отношении 1 :2,5 растворе 5-кратного вероналового буфера. Объем ре-суспеидирующего буфера теперь составляет Д часть от исходного объема сыворотки и содержит /ю часть раствора Са++ - Mg++. После перемешивания при 4°С в течение 15 мин добавляют равный объем воды и С1 хранят при -70 °С в объеме 0,5 мл.

Замораживать С1 необходимо очень быстро и до добавления его к ЕА, хранить на льду.

Очистка С4 осуществляется путем анионобменной хроматографии на колонке, заполненной целлюлозой, за которой следует блокэлектрофорез Pevikon. Очищенный готовый препарат С4 можно заказать в Cordis Laboratories. Инакти-вированную нагреванием (56 °С, 30 мин) человеческую сыворотку крови 3 раза адсорбируют /ю объема осадка эритроцитов барана при 0°С. Эту сыворотку в таком виде можно использовать и в качестве источника С4.

В некоторых случаях инактивированную нагреванием сыворотку нельзя использовать в качестве источника С4, так как соотношение С4 и С4Ь - СЗЬ INA слишком мало.

С2 выделяют и очищают из сыворотки крови человека путем катионобменной хроматографии и последующего блок-электрофореза Pevikon, а затем хроматографией на колонке, заполненной гидроксиапатитом. Препарат очищенного С2 можно получить из Cordis Laboratories. Перед использованием С2 обрабатывают йодом для получения окисленного С2, образующего стабильный комплекс с ЕАС 14 (ЕАСН0) и связывающего в 20-30 раз больше СЗ, чем наивный необработанный С2.

Реагент охС2 можно приготовить путем обработки свежей сыворотки крови человека йодом  и тиоцианатом калия (KSCN). Стандартный раствор йода приготавливают в 100-миллилитровой мерной колбе при растворении смеси 250 мг йода с 8,3 г йодистого калия (KI) в 4 мл 0,09 М фосфатного буфера, рН 6. В результате получают насыщенный раствор KI, в котором йод находится в растворенном состоянии. Доведение объема буфера до 100 мл способствует окончательному растворению KI.


Полезные записи
Мононуклеарные клетки

Выделение лимфоцитов

Количество молекул IgG на индикаторных эритроцитах...

Тест на наличие SIg до и после обработки

Два отмывания

Высвобождение фактора ингибиции миграции лейкоцито...

Обсуждение