Суспензия клеток

Категория: Статьи. 25 Апрель 2013

Суспензия клеток

Отвечающие и стимулирующие клетки перемешиваются в нужных соотношениях в культуральных сосудах в зависимости от того, сколько клеток требуется для культивирования; 0, -5ХЮГ отвечающих клеток +5X10 стимулирующих клеток в 4 мл среды MLC в 13X75 мм плоскодонных стеклянных или пластмассовых пробирках, или 6-25ХЮ6 отвечающих клеток +25ХЮГ стимулирующих клеток в 20 мл среды MLC в пластмассовых культуральных флаконах (Falcon, 3013). При работе с сингенными культурами MLTC, оптимальное соотношение отвечающих и стимулирующих клеток должно быть примерно 100:1.

Культуры инкубируются в атмосфере 5% СО при 37 °С, оптимальный период (обычно 5-7 дней).

Оставшиеся клетки центрифугируют, промывают один раз, количество живых клеток доводится до нужной концентрации. В зависимости от выбранных культуральных условий количество полученных после всех процедур клеток будет равно 10-50% от начального количества живых клеток.

В отличие от некоторых систем культур, которым требуется подкормка, данная система MLC обеспечивает непрерывное, постоянное развитие культуры мышиных лимфоидных клеток в течение 20-30 дней. Это позволяет проводить исследования, в которых подобные долгосрочные культуры рестимулируются in vitro, например на 0, 20, 40 и 60 дней. Следствием рекультивирования с соответствующими аллоан-тигенами (в свежей среде MLC) является повышение активности CTL до максимума после каждой рестимуляции.

Многие современные публикации, касающиеся вопросов изучения CTL, являются результатом работ, ставших возможными благодаря существованию данного быстрого, простого, количественного и хорошо воспроизводимого теста клеточно-опосредованного цитолиза.


Полезные записи
Некоторые сферы применения HLA-D-типирования

Разделение перитонеальных клеток

Препараты клеток

Действие варьирования клеточных концентраций

Характеристика связывания лимфоцитами агрегированн...

Разделение клеток костного мозга

Обсуждение