Стандартные растворы

Категория: Статьи. 13 Май 2013

Стандартные растворы

Линейный градиент готовят путем введения насосом 14 мл раствора низкой плотности в камеру, содержащую 14 мл раствора высокой плотности; скорость тока при введении жидкости вдвое меньше скорости выхода смешанного более плотного раствора. Градиент готовят в 30-миллилитровых пробирках. Сверху на градиент наслаивают клетки, содержащие в 2 мл 1% человеческого сывороточного альбумина в среде MEM Игла. Нанесение на градиент больше чемклеток может вызвать слипание клеток и нежелательное перемешивание слоев градиента.

Для центрифугирования пробирки Beckman помещают внутрь пластиковых плотно прилегающих пробирок. Центрифугирование проводят при 200 g в течение 15 мин при 4°С. Градиент собирают со дна пробирки и с помощью коллектора фракций, управляемого вручную, собирают фракции по 3 мл.

Смеситель и пробирки при необходимости можно стерилизовать 70% этанолом и последующим отмыванием стерильной дистиллированной водой.

Фракционирование лимфоцитов селезенки мыши. Исходной клеточной популяцией являлась популяция клеток селезенки 6-недельных мышей СВА. Спленоциты обрабатывались одним из следующих способов: 1) лизис   эритроцитов с помощью 0,83% NH4C1; 2) лизис с последующей адсорбцией клеток на пластике; 3) лизис с последующей обработкой порошком карбонильного железа и магнитом; 4) лизис с последующей адсорбцией клеток на пластике + обработка порошком железа+обработка магнитом.

При 2-м, 3-м и 4-м способах предварительной обработки популяции клеток содержали соответственно 80, 85 и 85-90% клеток, обладающих морфологией лимфоцитов.

Плотностное распределение спленоцитов мышей линии СВА, обработанных предварительно одним из вышеуказанных методов. Так же как и при ранее полученных результатах, большинство лимфоцитов мыши оказалось клетками средней или высокой плотности, примерно 1,075-1,085 г/см3. Выход клеток при наслаивании на градиент не более чем 6 клеток оказался порядка 70- 85% от нанесенного количества.


Полезные записи
Высвобождение фактора ингибиции миграции лейкоцито...

Вирус Эпштейна - Барра

Популяции НЭП

Инкубация очищенной популяции

Подготовка колонок для удаления с них lg-положител...

C4b-C3b инактиватор  (C4b-C3b INA)

Обсуждение