Разделение клеток

Категория: Статьи. 24 Апрель 2013

Разделение клеток

При фракционировании лимфоцитов от нормальных, не иммунизированных, доноров разделение проводилось при комнатной температуре. Колонку необходимо помещать на твердую подставку для того, чтобы предотвратить всяческие вибрации, и ни в коем случае не ставить колонку на один стол с центрифугой.

Из суспензии клеток с концентрацией 5х7 кл/мл для фильтрования на колонке берут такое количество, чтобы на 1 мл всего объема колонки приходилось не более 5Х6 клеток, т. е. иными словами, в колонку, имеющую объем 50 мл, можно вносить не более 250Х106 клеток. Скорость прохождения клеток через колонку определяется по скорости их выхода с колонки и должна составлять 1 см клеток в минуту и никогда не превышать 2 см в минуту. Начинать собирать клетки нужно еще в элюснте свободного объема колонки и продолжать некоторое время даже после того, когда не будут обнаруживаться клетки в выходящем объеме жидкости. Колонки функционируют как абсолютные разделители, но некоторые фракции клеток, специфически связывающиеся с гранулами, могут запаздывать и выходить в более поздних фракциях. Когда суспензия клеток поступила в колонку, экспериментатор должен быть готов тотчас же добавить среду, чтобы избежать любой остановки потока клеток через колонку.

В случае низкой жизнеспособности клеток, подлежащих разделению, колонка может засориться, что уменьшит скорость прохождения клеток и вызовет даже остановку. Чтобы этого не случилось, в верхнюю часть колонки вносят пипетку и осторожно перемешивают верхний слой гранул, где наиболее часто происходит засорение. Обычно этого достаточно для восстановления потока.

Прошедшие через колонку клетки отмывают и используют в дальнейших исследованиях. Подробное описание степени неспецифических задержек и различий в выходе клеток приведено в нескольких работах. При использовании гранул из материалов, описанных в данной работе, связавшиеся клетки можно элюировать механически, что позволяет получить 85% выход живых, функционально интактных клеток.


Полезные записи
Характеристика связывания лимфоцитами агрегированн...

Разделение клеток костного мозга

Гетерогенность HLA-D-

Элюция клеток с колонки

Обработанные сыворотки

Стеклянные бусы

Обсуждение