Разделение клеток костного мозга

Категория: Статьи. 24 Апрель 2013

Разделение клеток костного мозга

Результаты опытов показали, что при использовании контрольного уровня замораживания функциональные способности человеческих лимфоцитов полностью сохраняются in vitro. Можно перечислить следующие свойства лимфоцитов, сохраняющиеся после замораживания:

Суспензию лимфоцитов приготавливали ранее описанным способом с некоторыми изменениями. Дефибринированную кровь разбавляли 1:1 средой RPMI-1640, содержащей 25 мМ буфера Hepes. Для разделения лимфоцитов применяли метод равновесного плотностного центрифугирования, описанный Boyum. После разделения клетки промывали и вновь суспендировали в 80% растворе RPMI-1640 (Hepes), приготовленном на 20% сыворотке человеческой крови. Лимфоциты замораживали при разных концентрациях клеток.

Хотя концентрация не оказалась критической, выход лимфоцитов после замораживания уменьшался, если клетки замораживали в концентрациях выше, чем 50Х106 клеток на 1 мл.

Приготовленную клеточную суспензию охлаждали в тающем льду и затем разбавляли постепенно равным объемом следующих охлажденных растворов: RPMI-1640 (Hepes)-64%, цельной человеческой сыворотки-16%, ДМСО (диметил-сульфоксид) - 20%. Окончательная концентрация ДМСО была 10%. Смешивание необходимо производить медленно, чтобы избежать нагревания суспензии за счет тепла, выделяющегося при разбавлении ДМСО.

Клеточные суспензии переносили в стеклянные ампулы (2 мл), которые затем плотно закрывали.

Использовали автоматически контролируемую схему охлаждения, заключавшуюся в том, что в охладительную камеру поступал регулируемый поток жидкого азота, при этом температурная кривая соответствовала запрограммированной, которая компенсировала выделявшееся при кристаллизации тепло.


Полезные записи
Суспензия клеток

Действие варьирования клеточных концентраций

Характеристика связывания лимфоцитами агрегированн...

Гетерогенность HLA-D-

Разделение клеток

Элюция клеток с колонки

Обсуждение