Препаративное фракционирование активированных лимфоцитов

Категория: Статьи. 19 Май 2013

Препаративное фракционирование активированных лимфоцитов

Количество клеток в каждой фракции и распределение клеток по размерам определяют в электронном сепараторе по размерам частиц (Ceiloscope, Model 202, Linson Instruments, Stockholm). При необходимости можно определить морфологию клеток, приготовив мазки клеток, окрашенные May - Gruen-wald - Giemsa. Процедуру разделения можно проводить стерильно, при условии, что все части аппарата заранее стерилизованы.

Плексигласовые камеры стерилизуют путем промывания в 70% этаноле, а стеклянные камеры автоклавируют.

В нашей лаборатории данный метод разделения клеток применялся для разделения активированных клеток (бластов) от неактивированных (лимфоцитов) после иммунизации аллогенными клетками in vivo и in vitro.

В качестве модели Т-клеточной активации in vitro при аллогенной трансплантации использовали клеточно-опосредо-ванный лизис (КОЛ), индуцированный в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ). Лимфоциты селезенки мышей линии СВА были стимулированы в однонаправленной СКЛ клетками селезенки мышей линии ДВА/2, обработанными митомицином-С в описанных условиях. Пик блаеттранс-формации наблюдается на шестой день культивирования. В это время СКЛ содержит бласты, лимфоциты и макрофаги. В результате фракционирования путем седиментации при Ig были получены три основные фракции после сливания соответствующих субфракций.

При проверке клеток каждой Фракции на КОЛ оказалось, что только крупные клетки (бласты) являются клетками - киллерами. Клетки маленьких размеров (лимфоциты) не обладали цитолитической активностью.

Данная методика полезна при выделении атипичных (крупных) лимфоцитов из крови больных   инфекционным мононуклеозом и для препаративного фракционирования мелких лимфоцитов от крупных гемопоэтических клеток-предшественников в селезенке мыши.


Полезные записи
Материалы, необходимые для окраски методика окраск...

Гемолитическая активность комплемента

Соединение HP с сефарозой

Селективные функциональные активаторы лимфоцитов ч...

Дополнительные элементы

Обсуждение