Подготовка лимфоцитов к замораживанию

Категория: Статьи. 09 Май 2013

Подготовка лимфоцитов к замораживанию

В большинстве экспериментов использовали методику культивирования лимфоцитов с помещением в каждую культуральную пробирку ЗхЮ5 лимфоцитов, ресуспендированных в 1 мл среды. В более ранних экспериментах мы использовали микротехнику с применением пластинок для микротитрования. В том и другом случаях были получены сходные результаты.

Применяли модификацию метода, описанного Lightbody и др. Кровь для получения клеток-мишеней и эффектор-ных клеток собирали в один и тот же день. В качестве клеток-мишеней использовали лимфоциты, которые культивировали 3 дня без стимулятора и которые затем были простимулированы ФГА в течение дополнительного периода продолжительностью в 3 дня.

Далее клетки метили 51Сг и смешивали в пластинках для микротитрования с эффекторными клетками в соотношении: эффекторные клетки/клетки-мишени от 100:1 до 12,5:1.

Выход лимфоцитов после консервации их в течение разных периодов. Ясно выраженная потеря - 15% клеток, возможно, вызвана многочисленными отмываниями клеток после оттаивания. Жизнеспособность лимфоцитов выражается процентом тех клеток, которые не окрашиваются трнпановым синим.

После оттаивания клетки вновь подсчитываются, и для каждого теста лимфоциты используются в определенной концентрации.

После оттаивания лимфоциты стимулировали in vitro при помощи ФГА, PPD и аллогенных клеток. В этих экспериментах реактивность свежеизолированных лимфоцитов сравнивалась с реактивностью лимфоцитов от этого же донора, замороженных и размороженных в тот же день. Средний выход реактивных лимфоцитов составил более 85% с колебаниями от 70 до 105% для ФГА. Несколько большие колебания в реактивности наблюдались после стимуляции при Воздействие на способность лимфоцитов генерировать эффекторные клетки и на их способность выступать в роли клеток-мишеней в клеточно-опосредованном лимфолизисе (КОЛ)


Полезные записи
Фильтрование через нейлоновую вату

Функциональная характеристика розеткообразующих кл...

Перспективность клинического применения вещества

Фракционирование лимфоцитов на колонках, наполненн...

Литогенные-свойства антител против 62-микроглобули...

Культуральные камеры

Обсуждение