Подготовка колонок с гранулами, покрытыми иммунным комплексом

Категория: Статьи. 01 Май 2013

Подготовка колонок с гранулами, покрытыми иммунным комплексом

Мечение гранул с прикрепленными к ним крупно ядерными клетками требует соответственного снижения концентрации клеток в процессе мечения при температуре 4° С (чтобы уменьшить высвобождение белков из клеток, которые могут помешать связыванию клеток с гранулами). Покрытые клетками колонки затем промываются одним из подходящих растворов, желательно не содержащим белки (например, PBS) до тех пор, пока клетки не перестанут смываться со дна колонки. После этого колонки готовы и могут быть использованы в течение следующих нескольких часов.

Такие колонки необыкновенно чувствительны к вибрации и не должны передвигаться в процессе покрытия колонки клетками. Прикрепленные клетки могут быть покрыты и другими молекулами, например, иммуноглобулинами или различными компонентами комплемента; это будет способствовать в дальнейшем удалению из проходящей через колонку суспензии клеток, имеющих специфические рецепторы к этим структурам.

Основной принцип специфического удаления и в некоторых случаях обогащения клеток иммуноглобулиновыми молекулами - использование колонок, покрытых антителами против молекул (Ig), иммуноглобулинов (Ig), при условии, что у исследуемых видов такие клетки имеются. При этом используются различные материалы для изготовления гранул, различные антииммуноглобулиновые реагенты и т. д. В данной работе мы описываем только анти-Ig колонки со стеклянными или дегалановыми гранулами, покрытыми Ig и сверху покрытыми избытком анти-Ig антителами. В статье также будут описаны методы, в которых анти-Ig антитела применяются в избытке для покрытия Ig-положи-тельных клеток, которые затем проходят через колонки, покрытые Ig, а после этого снимаются с колонки.

Использование избытка анти-Ig антител в обоих случаях будет оставлять один участок, связанный с антигеном (в случае с Ig-антителами), свободный от комбинации со второй твердой фазой (Ig-положительные клетки в первом случае и Ig-покрытые гранулы -во втором).


Полезные записи
Реакция на митоген

Методика высвобождения 5,Сг

Лимфоциты различного происхождения

Удаление моноцитов

Агрегированные человеческие Ig

Частички железа в суспензии

Обсуждение