Частички железа в суспензии

Категория: Статьи. 29 Апрель 2013

Частички железа в суспензии

Смешивают 10 частей изопака 32,8% и 28 частей фикола 8% (в воде). Плотность доводят до 1,077 г/мл изопаком или дистиллированной водой. Разделяющую жидкость можно закупать в Nyegaard  Со в Осло (Норвегия) под названием Lymphoprep.

Дефибринизация осуществлялась при перемешивании 12 мл крови в пробирке, содержащей 25 стеклянных бусин диаметром 2-4 мм. 4

Частички железа в суспензии (реактив для разделения лимфоцитов) были получены из штата Нью-Йорк, Technicon Instruments Corp., Tarrytown.

Перитонеальные клетки, Бактотриптон (Difco, Детройт, Мичиган) растворяли в 0,9% NaCl при нагревании до 60-70° С. 1 мл 10% раствора вводили интраперитонеально каждой мыши. Через 4 ч, а в некоторых случаях через 1-3 дня после этого животных забивали и делали разрезы кожи живота. Кожные лоскуты отгибали и интраперитонеально вводили 0,9% NaCl, а затем введенную жидкость собирали через отверстие в брюшине пастеровской пипеткой.

Выделение мононуклеарных клеток (лимфоцитов и моноцитов) из небольших объемов крови.

Кровь, разведенная- 0,9% NaCl, наслаивается на изопак-фикол (Jp-Ficoll), при этом носик пипетки прислонен к стенке пробирки на высоте 5-10 мм от мениска жидкости. После центрифугирования клетки крови разделяются на 2 фракции: белый слой, состоящий из мононуклеарных клеток (и тромбоцитов) на поверхности, и фракцию, содержащую эритроциты и гранулоциты на дне пробирки. Мононуклеарные клетки легко собираются пипеткой.

Видимо, в основном эти клетки располагаются вокруг периферической части пробирки, но, чтобы быть уверенным в том, что собраны все мононуклеарные клетки, необходимо при сборе клеток двигать пипетку по всей площади поверхности пробирки. Рекомендуется следующая стандартная процедура.


Полезные записи
Подготовка колонок с гранулами, покрытыми иммунным...

Удаление моноцитов

Агрегированные человеческие Ig

Селективная активность Т и В-клеточных митогенов

Ингибиция миграции индикаторных лейкоцитов суперна...

Истощение В-клеток

Обсуждение